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壹种融合抗体ScFv-Fc畅通用表臻载体的构建

时间:2018-11-18 来源:[db:来源] 作者:[db:作者] 点击:加载中..
  

  为了构建壹个却供己在提交流动的ScFv区,表臻人小分儿子融合抗体ScFv-Fc的畅通用载体,使用RT-PCR技术扩增人抗体IgG1的Fc片断克隆到一齐丹酵母亲表臻载体pPICZα,将壹段人工分松的互补养鲜核苷酸链拔出产重组载体pPICZα/Fc中Fc区的下流,伸入2个却供小分儿子抗体ScFv-Fc的ScFv区己在提交流动的限度局限性酶切位点。区别扩增人抗狂犬病毒以及抗乙型肝炎症外面表抗原的ScFv片断,克隆到已构建的畅通用载体pPICZα/Fc,在一齐丹酵母亲中开说表臻。进壹步在1L环境下对活性抗体终止发酵,并使用proteinA亲和层析柱终止纯募化。运用酵母亲基因组PCR、ELISA、Western blotting、活性检测等试验对此小分儿子抗体的表臻终止生物学及避免疫学剖析。结实标注皓具拥有狂犬病毒抗原结合活性以及乙肝外面表抗原结合活性的人源抗体分儿子均得到成表臻,1L发酵环境下表臻量到臻20~30mg/L,protein A亲和层析纯募化后纯度>95%。切磋构建了却用于干用性抗体分儿子ScFv-Fc选择和表臻的畅通用载体并对其发酵、纯募化环境终止了摸索,为重组抗体分儿子诊断、治水疗试剂的开辟以及抗体的人源募化奠定了物质基础。......[持续阅读本文]

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